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      動物細胞株瞬時轉染和穩定轉染的區別
      發布時間:2022-09-05   點擊次數:93次
        通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養物稱為細胞株。
        
        動物細胞株是用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。
        
        原代培養的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細胞的生長就會出現停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有少數的細胞能夠度過“危機”而繼續傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細胞叫做細胞株。
        
        瞬時轉染和穩定轉染的區別:
        
        瞬時轉染:外源片段的表達時間短暫。這主要是因為外源導入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低,所以以染色體外形式存在,不能隨細胞分裂而一同復制導致拷貝數被稀釋導致的。
        
        而且考慮到細胞分裂會稀釋質粒的量,所以起初轉染的質??截悢蹈?。這就導致瞬時轉染呈現一個高拷貝到低拷貝迅速降低的過程,且無法在這個系統上實現可誘導表達。
        
        穩定轉染:是相對瞬時轉染而言,進入細胞的質粒整合入細胞基因組中,并能隨細胞分裂穩定傳遞下去。在這個系統中,質粒表達穩定,拷貝數低,且能實現誘導表達。穩定轉染并不是一種與瞬時轉染不同的方法,只是對瞬時轉染的細胞進行篩選,得到穩定整合的動物細胞株。
        
        穩定整合的幾率因基因傳遞的方法而異,跨度可以從10^-8到10^-1。因此,對于有的轉染方法,比如化學試劑介導的轉染,其整合幾乎可以忽略不計。質粒載體整合的位點并不是完全隨機分布,依據不同的基因傳遞方法,呈現不同的靶向傾向性,所以是一種半隨機整合。
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